EASI-EXTRACT VITAMIN B12免疫亲和柱配合液相色谱使用,用于维生素B12的样品纯化(中文翻译件仅供参考,以试剂盒内附的英文原件为准)
EASI-EXTRACT®VITAMIN B12(产品编号:P80/80B)
试剂盒组成
P80 10 EASI-EXTRACT VITAMIN B12
免疫亲和柱
P80B 50 EASI-EXTRACT VITAMIN B12
免疫亲和柱
用途及意义
VB12是人体发育、细胞生长所必须的营养物质,是一些酶的重要组成成分,并参与某些氨基酸的代谢反应。缺乏VB12会导致以及神经类疾病。天然的VB12主要存在于肉类及奶制品中,能添加到食品中的只有VB12一种构型。EASI-EXTRACT VITAMIN B12 用于纯化食品以及预混料中存在的VB12,通过带有紫外检测装置的反相液相色谱进行定量检测。此方法适用于检测食品游离型VB12或是VB12总量。由于食品中VB12含量低(0.3-5ug/100g),并存在游离态及间合态两种类型。VB12总量在胃蛋白酶消化产生可吸附蛋白质的VB12是必不可少的,如需要可添加α-淀粉酶来消化淀粉。在分析VB12总量时所添加的氰化物可使自然状态的钴氨素转化为VB12。
EASI-EXTRACT VITAMIN B12 检测应用单克隆抗体技术,具有高特异性,高灵敏度,快速,简单操作的特点。分析大量样品时免疫亲和柱可与自动装置连接。
EASI-EXTRACE VITAMIN B12中含有结合单克隆抗体的凝胶悬浮物,抗体对VB12具有高亲和性。当样品提取液通过免疫亲和柱时,VB12与抗体结合。加水洗脱非键和成分。加甲醇将抗体吸附的VB12洗脱下来。洗脱液加热干燥,溶于0.025%TFA的水溶液中。HPLC定量分析。验证试验
取100ml 50mM乙酸钠缓冲溶液(pH4.0),吸去250μl后向溶液中加入250μl的试验液(10μg/ml)并充分混匀。取10ml(250ng/0.25μg)该溶液加入到EASI-EXTRACT VITAMIN B12免疫亲和柱中,参照第3页中清洗,洗脱,蒸发甲醇等步骤进行处理。将洗脱物溶于1ml溶液A中。经HPLC 分析,当100μl上样溶液中检出50ngVB12时,表明回收率为。