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上海必优生物科技有限公司

德国拜发(R-Biopharm)试剂 硕腾ZOETIS动物诊断试剂

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酪蛋白检测试剂盒
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产品: 浏览次数:4300酪蛋白检测试剂盒 
品牌: 德国拜发(R-biopharm)
产品型号: R4602
产品规格: 48孔
最小起订量: 1 盒
供货总量:
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 长期有效
最后更新: 2020-06-11 15:23
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详细信息

产品简介
RIDASCREEN®FAST Casein(订货号:R4602)快速酪蛋白检测试剂盒,采用
夹心酶联免疫法,定量检测食品中的酪蛋白。
试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂,包括标准品。
试剂盒足够进行48 次检测(包括标准测定)。
定量分析需要使用微孔板酶标仪。
样品处理: 均质、提取和离心
检测时间: 样品制备(以10个 样品为例)....................约20 分钟 检测过程(孵育时间)......................................30 分钟
检测限: 0.12 mg/kg (ppm) 酪蛋白
定量限: 0.5 mg/kg (ppm) 酪蛋白
特异性: 试剂盒中使用的单克隆抗体可特异性识别牛奶的α-, ß- 和 κ-酪蛋白
与 ß-乳球蛋白没有交叉反应
与其他动物(绵羊,山羊)的酪蛋白没有交叉反应
RIDASCREEN®FAST Casein 10-02-09 3
1. 用途
RIDASCREEN®FAST Casein 快速酪蛋白检测试剂盒,采用夹心酶联免疫法,定量检测食品中如烘焙食品、巧克力、香肠、冰淇淋、葡萄酒及其他饮料等中的酪蛋白。
2. 概要
牛奶中含有约3.2 %的蛋白质,其中的10 %为β-乳球蛋白(乳清中的主要蛋
白),80 %为牛酪蛋白。β-乳球蛋白对所有过敏者,尤其是儿童而言意义重大,而随着此后的成长,酪蛋白逐渐成为主要的过敏原。酪蛋白(拉丁文写作
Caseus,意为奶酪)是一种粗糙片状凝固蛋白质,在牛奶中会形成粒子和并在牛奶
酸性条件下沉淀。
酪蛋白包括αs-酪蛋白,β-酪蛋白,κ-酪蛋白及γ-酪蛋白(牛奶蛋白纤维作用下β-酪蛋白的水解蛋白片段)。通过蛋白分解(利用实验室发酵),由κ-酪蛋白会产生一个疏水性(para κ-酪蛋白)和一个水溶性极性成分(macropeptid 巨球肽)。
牛奶既可以作为成份之一也可以作为污染物而存在于未经加工的及经过加工的食品中。根据2009 年11 月10 日颁布的欧盟条例2003/89/EG,食品标签上必须注明是否含有牛奶成份,因为牛奶可能引起过敏反应。食品中常常会添加入乳清(β-乳球蛋白)或酪蛋白酸盐(如在香肠类产品中)。因此,建议进行食品中酪蛋白的检测。
3. 检测原理
本试剂盒的检测原理是抗原抗体反应。微孔板包被有酪蛋白特异性抗体。加入标准品或样品溶液,其中含有的酪蛋白会和特异性抗体结合,形成抗体-抗原复合物。
没有结合的部分在洗涤步骤中被除去。然后加入酶标记的抗体(酶连接物)和抗体-抗原复合物结合,形成抗体-抗原-抗体复合物(“三明治”夹心法)。洗涤后在孔中加入底物/发色剂,结合的酶连接物将发色剂转化为蓝色。
加入反应终止液后颜色由蓝色转变为黄色。在450 nm 处测量,吸光度值与样品中
的酪蛋白浓度成正比。
4. 试剂盒组份
每一个盒中的试剂足够进行48 个试验(包括标准测定),盒中的组份如下:
1 x 48 孔微孔板(6 条每条8 孔) 包被有针对酪蛋白的抗体
5 x 标准品*),每瓶1.3 ml 0 ppm(零标准品),0.5 ppm,1.5 ppm,4.5 ppm,13.5 ppm 酪蛋白
水溶液,即用型 4 RIDASCREEN®FAST Casein 10-02-09
1 x 酶连接物(0.7 ml)..........................................................................红色瓶盖 过氧化物酶标记的抗体,浓缩液 1 x 底物/发色剂(10 ml).......................................................................棕色瓶盖 红色 1 x 反应终止液(14 ml)........................................................................黄色瓶盖 含 1 N 硫酸 1 x 提取缓冲液(125 ml)......................................................................白色瓶盖 20倍浓缩液 1 x 洗涤缓冲液( 100 ml).....................................................................棕色瓶盖 10倍浓缩液
*) 给出的浓度已经考虑了样品处理过程中产生的稀释倍数20。酪蛋白浓度可直接从标准曲线中读出。
5. 另需的试剂和设备
5.1. 设备:
− 微孔板酶标仪(450 nm)
− 离心机 + 离心管
− 水浴锅
− 研磨器、研钵、Ultra-Turrax 匀浆机或均质器
− 刻度移液管
− 可调式 20 μl - 200 μl 和 200 - 1000 μl 微量移液器
5.2. 试剂:
− 蒸馏水或去离子水
6. 操作者应该注意之事项
反应终止液含 1 N 硫酸(R36/38, S2-26)。
7. 储存条件
保存试剂盒于 2 - 8 °C,不要冷冻。
将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于2 - 8°C
条件下。
底物/发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
对过了有效期(见试剂盒外标签有效期)的试剂盒不再提供任何质量保证。 RIDASCREEN®FAST Casein 10-02-09 5
不能交叉使用不同批号的盒中试剂。
8. 试剂变质的迹象
− 底物/发色剂在使用前颜色变蓝
− 标准品5 的的吸光度值小于0.8 (E450 nm < 0.8)
9. 样品处理
以往分析的酪蛋白残留必须去除!样品处理应该在充分清洁或新的玻璃器皿中进
行。
同样,粉碎机等设备必须在每次样品处理后进行清洁,去除酪蛋白残留。
提取缓冲液为20 倍浓缩液。在稀释前在水浴锅中37 °C 条件下充分溶解可能出现
的结晶并混合。然后对加热后的浓缩液按比例1:20(1+19)用蒸馏水稀释(例
如:100 ml 缓冲液浓缩液 + 1900 ml 蒸馏水,或者直接加入蒸馏水至2500 ml)。稀释后的提取缓冲液在2 - 8 °C 条件下可保存约12 周。
− 5 g样品小心粉碎,研磨并充分混合
− 取其1 g 样品,加入20 ml 提取缓冲液(提取缓冲液的温度应为约60 °C)
− 充分混合,在60 °C 条件下提取10 分钟,偶尔振荡
− 离心:10 min / 2500 g / 尽量保持4 °C 或过滤(或将2 ml 提取液收集于一反应容器中,在微量离心机中高速离心10 分钟)
− 取100 μl 上清液或滤液每孔进行检测
备注:
样品提取物在2 - 8 °C 条件下可保存5 天。不用的提取物在-20 °C 条件下可保存数
月。
根据需求可提供其它例如针对烘焙食品和香肠及烘焙半成品粉的样品处理方法。
10. 检测步骤
10.1. 检测前的准备
使用之前将所有试剂回温至室温(20 - 25 °C)。
酶连接物(红色瓶盖瓶子)为浓缩液。由于稀释的酶标记物的弱稳定性,所以只稀
6 RIDASCREEN®FAST Casein 10-02-09
释实际需用量的酶连接物。在吸取浓缩液之前,要轻轻的振摇以便充分混均。用蒸馏水以1:11(1+10)的比例稀释酶连接物浓缩液(例如:200 μl 浓缩液 + 2.0 ml蒸馏水,足够2 个微孔板条用)。
洗涤缓冲液为10 倍浓缩液,在使用前浓缩液须按比例1:10(1+9)用蒸馏水稀释
(例如:100 ml 缓冲液浓缩液 + 900 ml 蒸馏水)。在稀释前如果存在结晶,应在37 °C 水浴锅中加热完全溶解稀释后的缓冲液在2 - 8 °C 条件下可保存约4 周。。
10.2. 检测过程
仔细洗板非常重要。避免在操作过程中微孔出现干燥。
每次检测不应使用多于3 条微孔板条(24 孔)
1. 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架,记录下标准品和样品的位置。
2. 将100 μl 标准品及处理好的样品溶液加到相应的微孔中,在室温条件下(20 -25 °C)孵育10 分钟。
3. 倒出孔中的液体,将微孔板架倒置在吸水纸上拍打(每轮拍打3 次)以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl 洗涤缓冲液(参见10.1.)洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。
4. 向每一个微孔中加入100 μl 稀释后的酶连接物溶液(参见10.1),小心混匀,在室温条件下(20 - 25 °C)继续孵育10 分钟。
5. 倒出孔中的液体,将微孔板架倒置在吸水纸上拍打(每轮拍打3 次)以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl 洗涤缓冲液(参见10.1.)洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。
6. 向每一个微孔中加入100 μl 红色底物/发色剂,充分混合后在室温(20 -25 °C)条件下暗处孵育10 分钟。
7. 向每一个微孔中加入100 μl 反应终止液,充分混合。在加入反应终止液后10分钟内于450 nm 处测量吸光度值。
11. 结果评估
请使用R-Biopharm 德国拜发公司专门为RIDASCREEN® 系列产品设计的应用软件
RIDA® SOFT Win(订货号:Z9999)来进行结果分析。
使用Cubic spline 功能进行结果评估。
关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书。
以下是没有使用软件的计算方法:
标准品的吸光度值和酪蛋白浓度mg/kg(ppm)的相互关系体现在半对数坐标系
统曲线图中。每个样品中的酪蛋白浓度mg/kg(ppm)可以通过校正曲线上的吸 RIDASCREEN®FAST Casein 10-02-09 7
光度值直接读出。
若检测结果与试剂盒中附带的质保证书相比较吸光度值(E450 nm)过高,则可能是洗涤不彻底或存在酪蛋白污染。
若样品的吸光度值(E450 nm)> 标准品5的吸光度值,则需要将样品进一步稀释后再次检测。样品应稀释至其检测吸光度值落在曲线的直线部分为佳。
请注意:
按照说明书进行操作,稀释倍数为20。酪蛋白浓度可以直接从标准曲线中读出(参见4. *)- 稀释倍数20 已经在标准品浓度值中被考虑。
如果采用大于1:20 的稀释倍数,在计算酪蛋白浓度时应考虑实际的稀释倍数。
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