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上海必优生物科技有限公司

德国拜发(R-Biopharm)试剂 硕腾ZOETIS动物诊断试剂

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杏仁/扁桃酸检测试剂盒
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产品: 浏览次数:1713杏仁/扁桃酸检测试剂盒 
品牌: 德国拜发(R-biopharm)
产品型号: R6901
产品规格: 48孔
最小起订量: 1 盒
供货总量:
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 长期有效
最后更新: 2020-06-11 15:23
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详细信息

产品简介
RIDASCREEN® FAST Mandel/Almond(订货号:R6901)快速杏仁检测试剂盒,采用夹心酶联免疫法,用于定量检测食品中杏仁含量。
试剂盒中含有酶联免疫检测所需的所有试剂,包括标准品。
试剂盒足够进行48次检测(包括标准测定)。
定量分析需要使用微孔板酶标仪。
样品处理: 均质、提取和离心
检测时间: 样品制备(以10个样品为例).....................约20分钟检测过程(孵育时间)......................................30分钟
检测限: 1.7 ppm 杏仁,相当于样品中0.00017 % 杏仁含量
检测限通过对确证后阴性样品(早餐谷物、饼干、冰激淋和巧克力)的多次测量计算得到(检测限 =平均值 + 3 x 标准偏差)。
定量限: 2.5 ppm 杏仁,相当于样品中0.00025 % 杏仁含量
特异性: 多克隆抗体可特异性检测杏仁蛋白。
与杏核的交叉反应............................................> 100 %
与腰果、巴西坚果、山核桃、榛果仁、椰子、夏威夷果、核桃、栗子、葵花籽、芝麻和利马豆等没有交叉反应。
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1. 用途
RIDASCREEN®FAST Mandel / Almond快速杏仁检测试剂盒,采用夹心酶联免疫法,用于定量检测食品中杏仁含量。(杏仁可以作为成份之一或外部感染物而存在和出现于未经加工的及经加热处理的食品中。)
2. 概要
杏仁是非常芳香的果仁,同时也是世界范围内广为分布的坚果。许多小吃及早餐中均含有杏仁成份。杏仁也作为原料成份用于许多食品的生产中,尤其是饼干和巧克力。杏仁是Prunidea属,与桃子亲源。其中高达25% 的蛋白质成份在具营养价值的同时也具有过敏性。其内含的95% 的蛋白质是水溶性的。强过敏性人员仅摄入毫克级别的杏仁便可引致过敏反应,症状轻则仅为过敏性皮炎,重则因过敏性休克导致死亡。因为杏仁过敏是终身性存在的且无法根治,所以对此类过敏人员而言,重要的便是避免摄入杏仁。
3. 检测原理
检测的基础是抗原抗体反应。微孔板中包被有针对杏仁蛋白的特殊抗体。加入标准品或样品,其中含有的杏仁蛋白和特殊的抗体结合形成抗体抗原复合物。没有结合的部分在洗涤步骤中被除去。随后加入过氧化物酶标记的抗体(酶连接物)。抗体酶连接物和抗体抗原复合物结合,形成抗体-抗原-抗体复合物(“三明治”夹心法)。没有结合的酶连接物在洗涤步骤中被除去。将底物/发色剂加入孔中。和抗体结合的酶发色剂转化为蓝色的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450 nm 处测量。吸光度值与样品中的杏仁浓度成正比。
4. 试剂盒组份
每一个盒中的试剂足够进行48个试验(包括标准测定),盒中的组份如下:
1 x 48孔微孔板(6条每条8孔) 包被有针对杏仁的抗体
5 x 标准品*),每瓶1.3 ml 0 ppm(零标准品),2.5 ppm,5 ppm,10 ppm,20 ppm 杏仁提取物水溶液,即用型
1 x 酶连接物(0.7 ml)..........................................................................红色瓶盖过氧化物酶标记的抗体,浓缩液
1 x 底物/发色剂(10 ml).......................................................................棕色瓶盖红色
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1 x 反应终止液(14 ml)........................................................................黄色瓶盖含1 N的硫酸1 x 过敏原提取缓冲液(125 ml)...........................................................绿色瓶盖 10倍浓缩液1 x 洗涤缓冲液(100 ml)......................................................................棕色瓶盖 10倍缓冲液
*) 已考虑了在样品处理的过程中产生的稀释倍数20。所以样品中杏仁浓度可直接从标准曲线中读出。
5. 另需的试剂和设备
5.1. 设备:
−微孔板酶标仪(450 nm)
−离心机 + 离心管
−振荡器
−水浴锅
−粉碎机,研钵,Ultra-Turrax匀浆机或者均质器
−刻度移液管
−可调式20 μl - 200 μl 和200 - 1000 μl 微量移液器
5.2. 试剂:
−蒸馏水或去离子水
6. 操作者应该注意之事项
反应终止液含1 N硫酸(R36/38, S2-26)。
7. 储存条件
保存试剂盒于 2 - 8 °C,不要冷冻。
将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封储存于2 - 8°C条件下。
底物/发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
对过了有效期(见试剂盒外标签有效期)的试剂盒不再提供任何质量保证。
不能交叉使用不同批号的盒中试剂。
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8. 试剂变质的迹象
−红色底物/发色剂在使用前颜色变蓝
−标准品5的吸光度值小于0.8(E450 nm < 0.8)
9. 样品处理
以往分析的杏仁残留必须去除!样品处理应该在充分清洁或新的玻璃器皿中进行。
同样,粉碎机等设备必须在每次样品处理后进行清洁,去除杏仁残留。
过敏原提取缓冲液为10倍浓缩液。在稀释前在水浴锅中37 °C条件下充分溶解可能出现的结晶并混合。然后对加热后的浓缩液按比例1:10(1+9)用蒸馏水稀释(例如:100 ml缓冲液浓缩液 + 900 ml蒸馏水,或者直接加入蒸馏水至1250 ml)。稀释后的提取缓冲液在2 - 8 °C条件下可保存约12周。
− 5 g样品小心粉碎,研磨并充分混合(巧克力样品融化并混合)
−取其1 g样品,加入20 ml提取缓冲液(提取缓冲液的温度应为约60 °C)。
−充分混合,在60 °C条件下提取10分钟,偶尔振荡。
−离心:至少10 min / 2500 g / 尽量保持4 °C 或过滤(或将2 ml提取液收集于一反应容器中,在微量离心机中高速离心10分钟)
−取100 μl上清液或滤液每孔进行检测
备注:
样品提取物在2 - 8 °C条件下可保存5天。不用的提取物在-20 °C条件下可保存数月。
10. 检测步骤
10.1. 检测前的准备
使用之前将所有试剂回温至室温(20 - 25 °C)。
特别重要的是,在使用标准品和酶连接物之前将其回温至室温(20 - 25 °C)(提前从冰箱中取出或加热,37 °C条件下加热30分钟)。如果加热不充分,会影响标准曲线。
抗体酶连接物(红色瓶盖瓶子)为浓缩液。由于稀释的酶连接物的弱稳定性,所以只稀释实际需用量的酶连接物物。在吸取浓缩液之前,要轻轻的振摇以便充分混均。用蒸馏水以1:11(1+10)的比例稀释酶连接物浓缩液(例如:200 μl浓缩液 + 2.0 ml蒸馏水,足够2个微孔板条用)。
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洗涤缓冲液为10倍浓缩液,对浓缩液按比例1:10(1+9)用蒸馏水稀释(例如:100 ml缓冲液浓缩液 + 900 ml蒸馏水)。稀释后的缓冲液在2 - 8 °C条件下可保存约4周。在稀释前如果存在结晶,应在37 °C水浴锅中加热使其完全溶解。
10.2. 检测操作
仔细洗板非常重要。避免在操作过程中微孔出现干燥。
每次检测不应使用多于3条微孔板条(24孔)
1. 将足够标准品和样品检测所需数量的孔条插入微孔板架,记录下标准品和样品的位置。
2. 将100 μl标准品及处理好的样品溶液加到相应的微孔中,在室温条件下(20 - 25 °C)孵育10分钟。
3. 倒出孔中的液体,将微孔板架倒置在吸水纸上拍打(每轮拍打3 次)以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl洗涤缓冲液(参见10.1.)洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。
4. 向每一个微孔中加入100 μl稀释后的酶连接物溶液(参见10.1.),充分混合,在室温条件下(20 - 25 °C)孵育10分钟。
5. 倒出孔中的液体,将微孔板架倒置在吸水纸上拍打(每轮拍打3 次)以保证完全除去孔中的液体。每孔加入250 μl洗涤缓冲液(参见10.1.)洗涤微孔。上述操作重复进行两遍。
6. 向每一个微孔中加入100 μl红色底物/发色剂,充分混合后在室温(20 - 25 °C)条件下暗处孵育10 分钟。
7. 向每一个微孔中加入100 μl 反应终止液,充分混合。在加入反应终止液后10 分钟内于450 nm 处测量吸光度值。
11. 结果评估
请使用R-Biopharm德国拜发公司专门为RIDASCREEN® 系列产品设计的应用软件RIDA® SOFT Win(订货号:Z9999)来进行结果分析。
使用Cubic spline功能进行结果评估。
关于标准曲线请参看试剂盒中附带的质保证书。
以下是没有使用软件的计算方法:
标准品的吸光度值和杏仁浓度mg/kg(ppm)的相互关系体现在半对数坐标系统曲线图中。每个样品中的杏仁浓度mg/kg(ppm)可以通过校正曲线上的吸光度值直接读出。
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将检测结果与试剂盒中附带的质保证书进行比较,若检测结果的吸光度值过高,尤其是零标准值过高,则可能是洗板不充分或者存在杏仁污染。
如果样品检测吸光度值(A450 nm)大于标准品5,须重新检测,样品应继续稀释,直到检测值位于曲线中线性区域之内。
请注意:
按照说明书进行操作,稀释倍数为20。杏仁浓度可以直接从标准曲线中读出(参见4. *)- 稀释倍数20已经在标准品浓度值中被考虑。
如果采用大于1:20的稀释倍数,在计算杏仁浓度时应考虑实际的稀释倍数。
备注:
巧克力中的杏仁成分可被检出。
RIDASCREEN®FAST Mandel / Almond杏仁检测试剂盒对于早餐谷物、饼干、冰激淋和巧克力样品的检测已经过认证。认证报告和进一步的信息可从R-Biopharm德国拜发公司获得。
阴性检测结果并不能说明杏仁污染浓度低于检测下限,同时样品中还可能含有杏仁的其他成分如脂类。
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